INFLUÊNCIA DOS CORANTES NATURAIS BIXINA E NOR-BIXINA E DOS FLAVONÓIDES LUTEOLINA E APIGENINA NA ATIVIDADE DA LIPASE

Leonardo Ramos Paes de Lima(PG)¹, Tânia Toledo de Oliveira(PQ)¹, Tanus Jorge Nagem (PQ)², Aloísio da Silva Pinto (PQ)³, Maria Goreti de Almeida Oliveira(PQ)¹, Adelson Luiz Araújo Tinoco (PQ)⁴, Marly Lourdes de Oliveira (PQ)¹, Cleysson Hermes Altoé (IC)⁵ , Maria Aparecida Leão(TEC)¹

¹Departamento de Bioquímica e Biologia Molecuar – UFV – MG;²Departamento de Química – UFOP – MG; ³Departamento de Veterinária – UFV – MG; ⁴Departamento de Nutrição e Saúde, UFV-MG; ⁵- Departamento de Química – UFV – MG.

“palavras-chave”: lipase, corantes naturais, flavonóides

Lipase é uma enzima que no organismo, degrada os triacilgliceróis liberando ácidos graxos e glicerol. Alguns flavonóides têm sido investigados pela propriedade de diminuir a concentração sanguínea de lipídeos, podendo ter ação direta na enzima lipase, ativando-a, e consequentemente degradando os triacilgliceróis. A lipase é específica para ésteres na posição a do glicerol bem como para ácidos de graxos de cadeia longa com mais de dez carbonos. A forma purificada da enzima é fortemente inibida por ácidos biliares que normalmente estão presentes no intestino delgado durante a digestão de lipídeos. O problema da inibição está ligado à uma colipase, que é uma proteína com 12Kda e que se liga à interfase lipídeo-água e à lipase, ligando-se à enzima. O sítio ativo da lipase pancreática tem 449 resíduos que contem o N- da cadeia terminal (resíduo 1-336), que contém a tríade catalítica.

O presente trabalho procurou caracterizar a ação de alguns corantes naturais e flavonóides sobre a atividade de lipase pancreática, a fim de verificar se estas substâncias possuem capacidade de modificar a atividade desta enzima in vitro. Com a finalidade de entender o mecanismo de ação de nor-bixina, bixina, apigenina e luteolina foram testados os seus efeitos sobre a atividade da lipase.

Os corantes naturais (bixina e norbixina, frações lipossolúvel e hidrossolúvel, respectivamente, do extrato de urucum) e os flavonóides (Luteolina e apigenina, também encontrados no urucum), foram testados na presença de lipase, e a atividade enzimática foi determinada pelo método de Cherry e Crandall, utilizando-se o Kit enzimático BIOCLIN, em presença de éster de glicerol como substrato a 37 ⁰C, em tampão Tris pH = 8,55, contendo azida sódica. As velocidades iniciais foram determinadas pela liberação do cromóforo a 412 nm. O estudo do efeito dos modificadores foram realizados comparando-se as análises feitas na presença e ausência dos corantes naturais e flavonóides, isoladamente.

As análises foram realizadas variando-se as concentrações dos compostos

em estudo da seguinte maneira: 6,0 x 10^-6 mol/L, 1,2 x 10^-5 mol/L, 1,8 x 10^-5 mol/L, 2,4 x 10^-5 mol/L, 3,0 x 10^-5 mol/L, 3,6 x 10^-5 mol/L, 4,2 x 10^-5 mol/L, 4,8 x 10^-5 mol/L, 5,4 x 10^-5 mol/L, 6,0 x 10^-5 mol/L, para Bixina, Norbixina, Luteolina e Apigenina. A concentração 0 mol/L refere-se à análise realizada na ausência destes modificadores, sendo a ação enzimática monitorada pela medida da absorvância a 412 nm.

Para as quantificações, utilizou-se o espectrofotômetro da marca Hitachi.

Os resultados obtidos na determinação da atividade da lipase em várias concentrações dos modificadores foram os seguintes:

Amostra sem os modificadores: (27,5 U.I),

Amostra com a Bixina: (28,8 U.I; 24,8 U.I; 29,1 U.I; 25,9 U.I; 31,1 U.I; 25,7 U.I; 26,3 U.I; 41,5 U.I; 67,4 U.I, 57,2 U.I; valores nas respectivas concentrações),

Amostra com a Norbixina: (24,8 U.I; 28,0 U.I; 28,1 U.I; 33,4 U.I U.I; 29,0 U.I; 30,8 U.I; 23,5 U.I; 38,8 U.I; 47,1 U.I; 23,1 U.I; valores nas respectivas concentrações),

Amostra com a Apigenina: (23,1 U.I; 27,0 U.I; 29,5 U.I; 20,8 U.I; 30,8 U.I; 33,0 U.I; 39,4 U.I, 25,6 U.I, valores nas respectivas concentrações),

Amostra com Luteolina: ( 23,4 U.I; 28,4 U.I; 25,2 U.I; 30,0 U.I; 34,6 U.I; 27,9 U.I; 30,9 U.I; 67,4 U.I; 45,5 U.I; 50,7 U.I; valores nas respectivas concentrações).

Pelos resultados apresentados, pode-se notar que, no geral, a atividade da lipase manteve-se constante até a concentração de 4,2 x 10^-5 mol/L para todos os modificadores, aumentando na concentração de 4,8 x 10^-5 mol/L, tendo-se atingido a ativação máxima na concentração de 5,4 x 10^-5 mol/L e voltando a diminuir na concentração de 6,0 x 10^-5 mol/L. Pode-se verificar que com o aumento da concentração dos modificadores aumentou-se a atividade da enzima lipase pancreática.

Pode-se concluir que todas as substâncias testadas aumentaram a atividade da lipase em determinadas concentrações, sendo que os modificadores que induziram a lipase a uma maior atividade, foram conferidas à bixina 67,4 U.I (na concentração de 5,4 x 10^-5 mol/L) e a Luteolina 67,4 U.I (na concentração de 4,8 x 10^-5 mol/L).

Esses resultados parecem comprovar uma explicação para os efeitos hipotrigliceridêmicos destas duas classes de substâncias corantes naturais bixina e nor-bixina e flavonóides luteolina e apigenina, todos extraídos do urucum.

Agências financiadoras: FAPEMIG, CNPq.