ANÁLISE ENANTIOSSELETIVA DE FLUOXETINA E NOR-FLUOXETINA EMPREGANDO A ELETROFORESE CAPILAR

¹Pierina Sueli Bonato (PQ) e ²Vera Lucia Lanchote (PQ)

Departamento de Física e Química¹ e Departamento de Análises Clínicas, Toxicológicas e Bromatológicas² da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto-USP

Palavras-chave: eletroforese capilar, fluoxetina, enantiômeros

Nos últimos anos tem sido observado um interesse cada vez mais acentuado na avaliação da atividade farmacológica de fármacos possuindo um ou mais centros de assimetria, já que as propriedades farmacocinéticas e/ou farmacodinâmicas dos enantiômeros podem diferir significativamente, como consequência de interações estereosseletivas com macromoléculas biológicas opticamente ativas^2,3. A disponibilidade de técnicas eficientes, seletivas e de baixo custo operacional como a eletroforese capilar, através da qual é possível a resolução, identificação e quantificação dos enantiômeros em matrizes complexas, tem possibilitado estabelecer essas diferenças estereosseletivas, contribuindo para esclarecer os mecanismos de ação, como também fornecer subsídios para a tomada de decisões referentes à produção do fármaco como racemato ou como enantiômero puro⁴.

Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi investigar a utilização da eletroforese capilar na resolução dos enantiômeros da fluoxetina e de seu metabólito nor-fluoxetina. A fluoxetina é um fármaco quiral, comercializada como racemato e prescrita com frequência para o tratamento da depressão, bem como de desordens do comportamento. O metabolismo através da n-dealquilação leva à formação do metabólito, também ativo, nor-fluoxetina. Os enantiômeros (R)- e (S)-fluoxetina possuem potência equivalente em ratos, no entanto, estudos realizados com os enantiômeros separadamente têm demonstrado que o efeito da (S)- fluoxetina é cerca de três vezes mais duradouro. Esta observação pode ser explicada em decorrência do processo de metabolização, visto que o metabólito (S)-nor-fluoxetina é cerca de 20 vezes mais potente, contribuindo para o efeito terapêutico da fluoxetina^1,5.

O equipamento de eletroforese capilar empregado nesse estudo é proveniente da THERMO SEPARATION PRODUCTS, consistindo de um analisador Spectraphoresis Ultra, um amostrador automático modelo Spectraphoresis Vial Server, um Detector UV-VIS modelo Spectraphoresis UV3000, operando em 220 nm, uma interface modelo Spectraphoresis SN4000 e um computador IBM operado com o software PC1000.

As separações foram obtidas empregando capilares de sílica fundida com diâmetro interno de 75 mm e comprimento de 45 cm (40 cm até o detector), recobertos com camada de poliimida (Eberline Instruments). Antes de cada análise o capilar era submetido a lavagem com solução de NaOH 0,1 mol/L (100 psi, 0,6 minutos), água (100 psi, 1,2 minutos) e a solução tampão de operação (100 psi, 0,5 minutos). As amostras eram introduzidas no capilar por injeção hidrodinâmica (0,8 psi, durante 5 segundos). A avaliação da enantiosseparação dos fármacos estudados foi feita através do fator de separação, a, calculado pela razão entre os tempos de migração de cada enantiômero.

A resolução dos enantiômeros da fluoxetina e nor-fluoxetina foi avaliada empregando b-ciclodextrina sulfatada (S-CD) como seletor quiral, em meio básico. Nessas condições, os fármacos (caracter básico) encontram-se na forma não ionizada e migram apenas devido ao fluxo eletroosmótico (na direção do detector). Quando os enantiômeros interagem com a ciclodextrina, migram em direção oposta. Dessa forma, o enantiômero que forma o complexo de inclusão mais estável com a S-CD apresentará maior tempo de migração.

Este estudo incluiu a avaliação de vários parâmetros operacionais na resolução dos enantiômeros do fármaco e de seu metabólito: concentração de S-CD (0,1 a 0,5 %), pH (9,0 a 10,0) e concentração do tampão borato (10 a 20 mmol/L), temperatura (18 a 25 ^oC) e voltagem (8 a 12 KV). Dos parâmetros avaliados conclui-se que a concentração de ciclodextrina é o mais importante. Nesse estudo, verificou-se que um aumento na concentração de ciclodextrina produz um aumento nos tempos de migração e fator de separação.

As condições de análise otimizadas foram: solução tampão borato 20 mmol/L, pH 10,0 contendo 0,5% de S-CD; voltagem aplicada de 12 KV, à 25 ^oC; injeção hidrodinâmica de 0,8 psi x 5 seg em capilar com diâmetro interno de 75 mm e 40 cm de comprimento. Nessas condições foi possível obter a completa resolução dos enantiômeros da fluoxetina e nor-fluoxetina, em tempo inferior a 15 minutos. Destaca-se ainda o baixo consumo do seletor quiral.

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FAPESP, CNPq