TRIAGEM E CONFIRMAÇÃO DE ANABOLIZANTES: b2 -AGONISTAS E ESTERÓIDES, POR CROMATOGRAFIA GASOSA ACOPLADA A ESPECTROMETRIA DE MASSAS –ÍON TRAP


Luciana Rego Monteiro dos Santos (IC)1, Marlice A. Sípole Marques (PQ)2 & Jarí Nóbrega Cardoso (PQ)1,2


1-Ladetec-Departamento de Química Orgânica (DQO)-Instituto de Química-Universidade Federal do Rio de Janeiro

2- Departamento de Química Analítica (DQA)- Instituto de Química –Universidade Federal do Rio de Janeiro

ladetec@iq.ufrj.br


palavras-chave: Anabolizantes, dopagem e CG-EM-IT


Os esteróides androgênicos, e os b2 agonistas com efeitos anabólicos, são os agentes farmacológicos mais freqüentemente usados em dopagem no esporte. O Comitê Olímpico Internacional (COI), e outras organizações responsáveis pelo controle de dopagem no esporte proibiram o uso dessas substâncias, devido ao efeito no desempenho atlético, e conseqüentemente no resultado das competições; e também pelos efeitos adversos que essas drogas podem ocasionar à saúde dos atletas [1].

Diferentes metodologias analíticas, têm sido publicadas, para a detecção dos anabolizantes, e seus metabólitos [16,2,3]. Muitas delas são baseadas na detecção por espectrometria de massas. Atualmente, a cromatografia gasosa, acoplada a espectrometria de massas (GC-EM), é a mais freqüente técnica usada para confirmar e quantificar esses compostos. [2-3]

O fluido biológico, comumente usado no controle de doping, é a urina. Essa matriz contém uma grande variedade de componentes, muitos, desconhecidos, em diferentes concentrações, os quais são co-extraídos, em alguma extensão, durante o preparo das amostras, e introduzidos com os anabolizantes no sistema GC-EM. Como resultado da co-eluição dos interferentes com o analito, , obtém-se sinais (picos espúrios), no espectro de massas, e com isso errôneas interpretações [4]. Por isso, logo após a etapa de extração do analito da matriz, é necessário que se faça uma etapa de clean-up da amostra, onde o analito é purificado e concentrado. As técnicas de clean-up utilizadas neste trabalho são: extração líquido-líquido (ELL), extração por fase sólida (EFS), cromatografia por imunoafinidade (CIA) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE).

Atualmente, técnicas de detecção mais refinadas como espectrometria de massas acoplada a espectrometria de massas (EM-EM), cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas de alta resolução (CG-EMAR), e cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas-íon trap (CG-EM-IT), vem sendo avaliadas a fim de se obter uma melhor razão sinal/ruído, possibilitando a detecção de anabolizantes em nível traço (ppb-ppt).

No presente trabalho foi realizado um estudo comparativo das seguintes técnicas de clean-up; ELL, CIA e EFS. Verificou-se a eficiência dessas técnicas quanto: a precisão, a recuperação, o limite de detecção e a qualidade do extrato final durante a avaliação da metodologia analítica. O analito foi então, detectado, identificado, e quantificado por CG-EM e CG-EM-IT.

Durante a etapa de clean-up da amostra, verificou-se que a técnica de ELL seguida por CIA, possibilitou a obtenção de um extrato mais puro, como pode ser observado na figura 1. O limite de detecção da metodologia analítica para alguns esteróides como: metiltestosterona, estanozolol e metandienona, foi menor que 2 ppb. Em relação aos b2-agonistas, a ELL, empregando como solvente orgânico (TBME: t-butanol) 5:1, v/v, possibilitou uma recuperação para os analitos superior a 85%, e um limite de detecção da metodologia analítica de 1 ppb.

Figura 1: Espectro de massas (a) e fragmentograma (b) obtido da análise de uma urina positiva de metiltestosterona, após clean-up por CIA e detecção por CG-EM-IT


  1. IOC Definition of Doping and List of Doping Classes and Methods. IOC. Lausane,1996.

  2. M. Donike, H. Geyer, A. Gotzman, M. Kraft, F. Mandel, E. Nolteernsting, G. Opfermann, G.Sigmund, W. Schanzer, G. Zimmermann, Dope Analysis. International Athletic Foundation World Symposium of Doping in Sport, Florence (1997) 53-80.

  3. W. Schänzer, M.Donike, Anal. Chim. Acta, 275 (1993) 23-48.

  4. J. Muñoz-Guerra, D. Carreras, C. Soriano, C. Rodríguez, A.F. Rodriguéz. Use of íon trap gas chromatography-tandem mass spectrometry for detection and confirmation of anabolic substances at trace levels in doping analysis. Journal of Chromatography B,704 (1997) 129-141.

Agência Financiadora do trabalho: FAPERJ