ANÁLISE DOS LIMONÓIDES 12-HIDROXI-AMOORASTATONA E AZADIRACTINA EM EXTRATOS DE Melia azedarach POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA ACOPLADA A ESPECTROMETRIA DE MASSAS, LC/ApCI-MS/MS
Regina Maria Geris dos Santos (PG), Edson Rodrigues Filho (PQ), João Batista Fernandes (PQ), Paulo César Vieira (PQ), Maria Fátima das G. F. da Silva (PQ)
Departamento de Química da Universidade Federal de São Carlos, São Carlos-SP
regina@dq.ufscar.br; edson@dq.ufscar.br
palavras-chave: Melia azedarach, limonóide, espectrometria de massas
INTRODUÇÃO
Melia azedarach (Meliaceae), uma árvore nativa da Pérsia, Índia e China e amplamente cultivada no Brasil [1,2], apresenta atividades medicinal e inseticida, atividades estas, atribuídas aos limonóides [3,4]. Os limonóides formam um grupo de derivados triterpenoídicos que possuem importantes antividades biológicas tais como a inibiçào de crescimento de tumores cancerígenos em animais de laboratório e atividade inseticida e, consequentemente, muito estudados nos últimos anos [5].
A caracterização dessas substâncias tem sido realizada através da fitoquímica clássica. Com o desenvolvimento da instrumentação analítica ocorrido nas últimas décadas, a análise de mistura de grande complexidade torna-se viável em um tempo relativamente curto, podendo funcionar como uma metodologia alternativa para a análise desses produtos naturais. Os sistemas de cromatografia líquida acoplada às novas formas de ionização, como por exemplo, ApCI, permitem a análise de substâncias de alta polaridade e alta massa molar, com identificação tanto pelos tempos de retenção característicos quanto pelo espectro de massas que fornecem informação estrutural sem a necessidade do isolamento desses compostos [6].
OBJETIVOS
O objetivo desse estudo foi desenvolver um método fácil e confiável de cromatografia líquida de alta eficiência com deteção por diode array e por espectrometria de massas tandem (LC/ApCI-MS/MS) para determinar a presença e distribuição dos limonóides 12-hidroxi-amoorastatona (1) e de azadiractina (2) nos extratos obtidos de M. azedarach.
EXPERIMENTAL
Os extratos alcoólicos foram obtidos do córtex e xilema das raízes, córtex do caule, folhas, frutos verdes e frutos secos. A pré-purificação desses extratos foi realizada por extração em fase sólida (EFS). A análise por HPLC foi realizada uitlizando um detector de diode array. Na análise de LC/MS, a interface foi do tipo ApCI e o espectrômetro de massas operou no modo negativo de ionização. As metodologias desenvolvidas foram testadas com limonóides padrão e aplicadas nos extratos.
RESULTADOS
As metodologias desenvolvidas permitiram a deteção desses limonóides em quantidades mínimas de extratos (aproximadamente 20mg) em um tempo relativamente curto. Uma boa separação dos compostos presentes nos diferentes extratos por HPLC foi obtida usando um gradiente com metanol/água.
Ambos os espectros de UV e EM foram obtidos para cada extrato e comparados. Os limonóides foram identificados por seus tempos de retenção característicos, espectro de massas e comparação com os padrões injetados sobre as mesmas condições, permitindo assim, a confirmação da presença desses dois limonóides no córtex e xilema das raízes e no córtex do caule. No extrato obtido das folhas não foi encontrado o limonóide 1 e os extratos dos frutos secos e verdes ainda estão em análise.
CONCLUSÕES E PERSPECTIVAS
O uso de CLAE/EM em análise de extratos pré-purificados permitiram a caracterização direta dos limonóides 12-hidroxi-amoorastatona e azadiractina nos extratos de Melia azedarach. A técnica se mostra, portanto, um método conveniente para a análise de limonóides em extratos e uma alternativa valiosa à fitoquímica clássica para o estudo sistemático de plantas medicinais.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. NAKATANI, M.; HUANG, R. C.; OKAMURA, H.; IWAGAWA, T. & TADERA, K. “Salannal, a new limonoid from Melia azedarach Linn”. Chemistry Letters, 995, 1995.
2. KELECOM, A.; CABRAL, M.M.O. & GARCIA, E. S. “A new euphane triterpene from the Brazilian Melia azedarach”. J. Braz. Chem. Soc., 7(1): 39-41, 1996.
3. NAKATANI, M.; HUANG, R. C.; OKAMURA, H. & IWAGAWA, T. “The structure of a new antifeeding meliacarpinin from Chines Melia azedarach L.” Chemistry Letters, 2125-2128, 1993.
4. SRIVASTAVA, S. K. & GUPTA, H. O. “New limonoids from the roots of Melia azedarach Linn”. Indian Journal of Chemistry, 24B: 166-170, 1985.
5. OHTA, H.; FONG, C. H.; BERHOW, M & HASEGAWA, S. “Thin-layer and high performance liquid chromatographic analyses of limonoids and limonoid glucosides in Citrus seeds”. Journal of Chromatography, 639: 295-302, 1993.
6. BALDI, A.; ROSEN, R. T.; FUKUDA, E. K. & HO, C. “Identification of nonvolatile components in lemon peel by high-performance liquid chromatography with confirmation by mass spectrometry and diode-array detection”. Journal of Chromatography A, 718: 89-97, 1995 [FAPESP]